Главная

Значение физического взаимодействия

Естественно было предположить, что антигеннезависимое обратимое связывание лимфоцитов с макрофагами переходит в стабилизированное антигеном специфичное взаимодействие, что приводит к активации и пролиферации Т-клеток. Однако строго доказать осуществление событий именно в такой последовательности оказалось достаточно трудно. Данные, подтверждающие эту точку зрения, были получены в опытах с цитохалазином В — ингибитором многих форм активности мембраны. Добавление цитохалазина В в начале культивирования подавляло антигензависимое связывание иммунных лимфоцитов с макрофагами, а также и активируемую антигеном пролиферацию лимфоцитов. Чем позже добавляли цитохалазин В в культуру, тем слабее был его ингибирующий эффект. Кроме того, цитохалазин В подавлял антигеннезависимое связывание лимфоцитов с макрофагами. Таким образом, подавление этого этапа предотвращало последующее антигензависимое взаимодействие, выявляемое как физическими, так и функциональными тестами. Остается, однако, возможность того, что цитохалазин В может ингибировать антигензависимые физические и функциональные взаимодействия непосредственно, нарушая механизм экспонирования антигена на макрофагах или блокируя восприятие анти-генного сигнала иммунным Т-лимфоцитом. В любом случае эти наблюдения указывают на тесную связь между физическим взаимодействием макрофагов с лимфоцитами и осуществляемой антигеном активацией иммунных Т-лимфоцитов.

Судьба антиген-специфических Т-лимфоцитов, связавшихся с монослоем инкубированных с антигеном макрофагов, детально исследовалась в опытах с использованием популяции лимфоцитов, сильно обогащенной антиген-специфическими клетками, полученными с помощью положительной селекции культур in vitro. Такие лимфоциты связывались с макрофагами быстрее (за 1—8 ч), чем только что эксплантированные Т-клетки. После достижения максимального уровня прикрепления (4—8 ч инкубации) Т-клетки начинали откреп-ляться от монослоя макрофагов. Скорость диссоциации постепенно становилась выше, чем скорость ассоциации, и в результате число лимфоцитов на один макрофаг в последующие 72 ч постепенно уменьшалось. Если процесс реассоциации предотвращали, удаляя свободные лимфоциты из культуральной среды, то уменьшение числа связанных лимфоцитов было еще более заметным. Культу- ральная среда, полученная от культур, в которых лимфоциты активно откреплялись от макрофагов, не подавляла связывание свежих Т-лимфоцитов со свежим монослоем макрофагов, что исключает возможную определяющую роль растворимых ингибирующих факторов в наблюдаемом процессе диссоциации.

Монослой макрофагов, инкубированных с антигеном, можно также использовать в качестве иммуносорбента для удаления Т-лимфоцитов, специфических в отношении растворимых белковых антигенов. Т-клетки, не прикрепившиеся к монослою макрофагов в течение нескольких часов инкубации, были лишены способности к пролиферативной реакции на антиген и способности функционировать как хелперные Т-клетки. специфические для данного антигена. Процедура адсорбции была специфичной, поскольку позволяла избирательно подавить пролиферативную реакцию к одному из двух антигенов в том случае, если исходная популяция Т-лимфоцитов реагировала на оба антигена, а монослой макрофагов инкубировали только с одним из них.

Специфическая сорбция примированных Т-лимфоцитов на монослое макрофагов, инкубированных с антигеном

Агент, с которым инкубировали монослой макрофагов Метод снятия лимфоцитов с монослоя Ответ (имп/мин) на
ОВА ОБПТ
ОВА

ФРФБ

Смывание
Элюция
Смывание
Элюция
8300
68 900
19 400
НО
28 400
НО
26 800
НО

Подавление реактивности неприкрепившихся к монослою лимфоцитов было вызвано связыванием реагирующих Т-лимфоцитов с макрофагами: у лимфоцитов, прикрепившихся к монослою, обнаруживалась повышенная реактивность на антиген.

В этом взаимодействии непосредственное участие принимают молекулы Iа, о чем свидетельствовала способность сыворотки против Iа подавлять процесс адсорбции. В то же время антитела к антигену не оказывали влияния на процесс связывания. Попытки подавить процесс адсорбции высокой концентрацией растворимого антигена в среде также потерпели неудачу; в большинстве работ избыток растворимого антигена даже усиливал связывание. Скорее всего, это было связано с тем, что добавление растворимого антигена в культуральную среду усиливал процесс его презентации макрофагами. Если бы Т-лимфоциты распознавали антиген и Iа с помощью двух совершенно независимых рецепторов, то следовало бы ожидать, что при повышении концентрации растворимого антигена в среде увеличивалось бы не только связывание с антигеном на поверхности макрофагов, но и связывание со свободным антигеном. Поскольку полученные данные показывают, что свободный антиген увеличивает связывание Т-лимфоцитов с макрофагами, они свидетельствуют в пользу совместного распознавания, так как оно должно приводить к повышенному связыванию Т-лимфоцитов с Ia-положительными несущими антиген макрофагами при повышении концентрации растворимого антигена, а не к повышению связывания с растворимым антигеном.

Copyright © 2011-2012