Главная

Основные понятия. Исторический очерк

Идиотипическими детерминантами называют антигенные детерминанты, локализованные на вариабельных областях цепей иммуноглобулинов. Идиотоп — это единичная детерминанта, а вся группа идиотопов отдельно взятого вариабельного домена составляет идиотип. Во многих случаях не известно, обнаруживается ли при использовании данной антисыворотки один или более идиотопов, и поэтому большинство исследователей называют антисыворотки к вариабельным областям цепей антиидиотипическими. Вследствие весьма существенного разнообразия структур вариабельных доменов число идиотипов, которые может экспрессировать индивидуальное животное, очень велико. Это позволяет широко использовать антисыворотки к идиотипическим детерминантам для обнаружения и сравнения вариабельных областей.

Теоретически любой экспонированный участок вариабельной области тяжелых и легких цепей может быть иммуногенным. Описаны как идиотипы, локализованные лишь на VL- или VH-цепях, так и идиотипы, получающиеся в результате комбинации VL-цепей с VH-цепями. Идиотипические детерминанты обнаружены в участках связывания антигена и на каркасных участках. Поэтому нелегко вывести общие закономерности об идиотипических детерминантах.

Поскольку потенциально идиотипических детерминант у иммуноглобулиновой молекулы очень много, то большинство антиидиотипических антисывороток, скорее всего, полиспецифично, что вносит дополнительные сложности в изучение идиотипов.

Впервые о наличии в иммуноглобулинах общих и индивидуальных антигенных детерминант сообщили Канкель, Лосс и сотрудники около тридацати лет назад. К середине 60-х годов стало очевидно, что индивидуальные антигенные детерминанты характерны для вариабельных доменов. Антисыворотки, полученные к гомогенным миеломным белкам человека, после тщательного истощения другими миеломными белками и нормальными сывороточными иммуноглобулинами все-таки сохраняли способность к связыванию иммуногена. Используя подобный подход, Канкель установил, что должно быть всего по меньшей мере 107 вариантов вариабельных областей иммуноглобулинов человека. Удэн, получая обычным способом антитела к вариабельным участкам, показал, что существуют идиотипы, общие для антител разной спеицифичности. Таким образом, хотя первоначально предполагалось, что идиотип явля ется уникальной характеристикой отдельного клона, позднее понятие это расширилось, и к одному идиотипу стали относить семейства антител с одинаковой или различной специфичностью, но с одинаковыми идиотипическими свойствами.

Для получения антисывороток к вариабельным участкам цепей миеломных белков использовали различные подходы: один из них изображен на рисунке.

Приготовление антиидиотипических антисывороток.

В данном примере кролики были иммунизированы мышиным миеломным белком, специфичным к ФХ.
В антисыворотке содержались антитела к детерминантам CL-, СH-, VL- и VH-областей.
Показано, что антитела к константным областям могут быть удалены из антисыворотки преципитацией нормальными иммуноглобулинами мыши
либо абсорбцией на этих же иммуноглобулинах, фиксированных на не-растворимом носителе. Остающиеся антитела специфичны к идиотипическим детерминантам.

Как правило, иммунизацию проводят миеломным белком, а истощение — нормальной сывороткой или другим миеломным белком с такими же константными, но с отличающимися вариабельными областями цепей. В результате должна получаться антисыворотка против всех тех идиотипических детерминант имму- ногена, которых почти нет у иммуноглобулинов нормальной сыворотки или у миеломных белков, использованных для истощения.

Copyright © 2011-2012