Главная

Разнообразие гаметных F-областей генов тяжелых цепей

Ряд исследователей приступил к изучению локуса генов VH в гаметном состоянии. Гивол и др. при помощи VH-зонда, полученного из клона кДНК МРС11, провели скрининг библиотеки ДНК эмбрионов мыши и обнаружили несколько сильно гибридизующихся клонов. Было показано, что два из них содержат по две последовательности VH с промежутком между ними около 7 и 12 тпн. Последовательность трех из этих генов была определена так же, как последовательность четвертого гена из другого клона. Оказалось, что исследованные гены соответствуют одной из пяти подгрупп, на которые разделены аминокислотные последовательности VH мыши (подгруппа VHII), и на 80—90% гомологичны зонду МРС11. Эти данные подтверждают, что родственные VH-гены расположены в хромосоме вблизи друг от друга. Интересно, что три из четырех проанализированных генов, по-видимому, неспособны к экспрессии; один из них несет мутацию, разрушающую инициирующий кодон AUG, а два других — терминирующие кодоны в одной фазе с рамкой считывания. Возможно, эти гены играют некоторую роль в создании разнообразия, участвуя в межгенной рекомбинации или генной конверсии. Однако более вероятно, что они представляют собой неизбежные «отходы», возникающие при необходимости поддерживать составленную многими копиями родственных генов «библиотеку», часть которой может экспрессироваться с достаточно низкой интенсивностью, и давление отбора в сторону сохранения «правильности» таких генов окажется низким. В любом случае, присутствие таких псевдогенов в заметных количествах означает, что при «подсчете генов», основанном на числе наблюдаемых при переносе по Саузерну полос, число функциональных генов можно переоценить.

Сравнивая с помощью блоттинга по Саузерну ДНК миеломы МОРС104Е и гаметную ДНК (из печени), Рехави и др. смогли установить, что подгруппа генов VHII расположена с 5'-стороны от подгруппы VHIII. Миелома МОРС104Е гаплоидна по генам Н-цепи и продуцирует миеломный белок VHII-IgM. При сравнении результатов блоттинга ДНК миеломы МОРСЮ4Е и печени с использованием зондов VHII и VHIII (полученных из клона кДНК тяжелой цепи S107) оказалось, что в клетках МОРСЮ4Е отсутствует весь набор генов VHIII, но сохраняются все полосы VHII, имеющиеся в гаметной ДНК. Если считать, что делеция возникает вследствие F-Z)-J-рекомбинации, то полученный результат означает, что гены семейства VHIII лежат между рекомбинировавшими VHII- и J-генами, располагающимися вблизи Сμ, тогда как остальные гены VHII могут избежать делеции в том случае, если они располагаются с 5'- стороны от рекомбинировавшего гена. Такой подход должен оказаться полезным для дальнейшей работы по картированию генов. Другим потенциально полезным подходом для картирования локуса VH может служить соотнесение данных блоттинга по Саузерну с классическими маркерами идиотипов и аллотипов. Бен-Нериа и др. использовали зонды VHII для блоттинга ДНК из 16 линий миелом. Полученные ими результаты в целом хорошо коррелируют с Igh-аллотипом, а выявившиеся различия могут даже оказаться полезными (например, содержать информацию о гаметной рекомбинации между генами VH и СH).

Copyright © 2011-2012