Главная

Соматические мутации в легких цепях

Выявление различий в последовательностях нуклеотидов, в перестроенных х-генах миелом и предполагаемых гаметных предшественниках этих генов отчетливо свидетельствует о том, что гены VK подвержены соматическим мутациям. Такого рода анализ, как и аналогичные исследования, проведенные на генах VH, оказались сопряжены со значительными затруднениями, отсутствовавшими в случае описанной выше системы λ. Наличие единственного гаметного гена означает, что любое отличие последовательности миеломного гена λ1 от этого гена должно быть следствием соматической мутации. Для систем же FH и Vx, напротив, идентификация миеломного гена как продукта соматической мутации надежна лишь постольку, поскольку показано, что этот ген отличается от всех гомологичных генов V гаметного генома, образующих семейство, иногда довольно большое.

Печ и др. использовали V-зонды из двух перестроенных генов х мышиной миеломы (обозначаемой «Т») для выделения предполагаемых гаметных предшественников гена V из библиотеки геномной ДНК. Для того чтобы идентифицировать специфические предшественники каждого из миеломных генов F, они проклонировали гаметные гены Vx, соответствующие всем полосам Саузерн-блоттинга, интенсивно гибридизующимся с данным F-зондом. Затем было показано, что в каждом случае лишь для одного из клонов участки расщепления рестриктазами соответствуют таковым перестроенного гена миеломы. Сравнение последовательностей перестроенного гена V и гаметного предшественника выявило в каждом случае по шесть нуклеотидных замен. Хотя некоторые из альтернативных объяснений полностью исключить нельзя, эти изменения последовательности почти наверняка являются результатом соматических мутаций.

Другой пример соматических мутаций в генах Vx описали Гершенфельд и др. (и независимо Селсинг и Шторб), которые получили клоны предполагаемых гаметных предшественников для гомологичных генов Vx, экспрессируемых миеломами МОРС167 и МОРС511. В этом случае блоттинг по Саузерну выявил наличие в гаметной ДНК единственного близкородственного гена V. Когда этот ген проклонировали и определили его последовательность, в нем выявились отличия от последовательности МОРС167 по четырем нуклеотидам. Оказалось, что для того, чтобы кодировать последовательность МОРС511, он должен содержать не менее пяти замен. Вследствие различий в сайтах расщепления рестриктазами, предопределенных последовательностями МОРС511 и МОРС167, оказалось возможным с помощью блоттинга по Саузерну показать, что в гаметном геноме не существует гена, идентичного миеломным последовательностям. Следовательно, эти отличия в нуклеотидных последовательностях возникли в результате соматических мутаций.

Эти работы подтвердили роль соматических мутаций в системе генов Vx, предсказанную исходя из большего числа аминокислотных последовательностей х в сравнении с числом гаметных генов Vx, оцененным методами гибридизационной кинетики и блоттинга по Саузерну. Эти исследования, однако, не устранили упомянутой выше формальной возможности того, что изменения последовательности, наблюдаемые в культивируемых в лабораторных условиях миелом, могут отражать нефизиологическое окружение генов в этих клетках.

Copyright © 2011-2012