Множественность генов V

Совершенно иные результаты получаются при использовании для гибридизации (после блоттинга) зонда, содержащего V-область кДНК: всегда выявляется несколько полос. Для определения количества различных генов, гибридизующихся с такими зондами, Сейдман и др. применили двумерный блоттинг. EcoRI-фрагменты гаметной ДНК фракционировали колоночной хроматографией с обращенной фазой (RPC-5). Полученные фракции разделяли электрофорезом, переносили на фильтры и гибридизовали с генами V из кДНК клонов, полученных из двух различных миелом мыши. С помощью двумерной системы удалось разделить некоторые фрагменты, комигрирующие при обычном одномерном разделении, однако число определяемых этим методом различных генов все же дает лишь минимальную оценку. На каждой из радиоавтограмм выявлялось от шести до десяти полос с различной интенсивностью; для двух разных F-ДНК-зондов был получен разный набор полос. Авторы пришли к выводу, что каждый из зондов выявляет семейство родственных генов V, обладающих различной степенью гомологии с зондом. Как будет видно из дальнейшего изложения, этот вывод нашел подтверждение в последовавших экспериментах по клонированию, что позволило приблизительно оценить величину репертуара гаметных генов V. 

Copyright 2011-2012