Главная

Получение тканевых экстрактов (3M KCI-МЕТОД)

Получение тканевых экстрактов. Методика
Получение тканевых экстрактов. Обсуждение

Для изучения различных явлений, относящихся к реакциям иммунитета, необходимо выделять антигены из экстрактов тканей. Большая часть этих антигенов (антигены основного комплекса гистосовместимости, тканевые антигены, антигены групп крови, рецепторы митогенов, опухолевых и трансплантационных антигенов) находятся на внешней мембране клеток. Иногда поверхностные антигены обнаруживаются также и внутри клеток (некоторые вирусные, опухолевые и фетальные антигены).

Согласно новейшим представлениям о строении клеточных мембран как о жидкой мозаичной структуре, большая часть иммунологически значимых антигенов относится к «интегральным» белкам цитоплазматической мембраны. Они относительно прочно связаны с мембраной и не могут быть отделены без ее разрушения. При получении растворимых мембранных антигенов выделяют эти белки в молекулярно-дисперсной форме с сохранением их биологической активности. Любой метод выделения означает потерю или изменение биологических свойств по сравнению с нативным состоянием, причем следует также учитывать возможность артефактов. Существует большое число способов разрушения плазматических мембран: обработка ультразвуком, пониженным или повышенным осмотическим давлением, кислотами, ферментами, детергентами, механическое воздействие. Как правило, используют комбинацию нескольких методов. Из довольно большого числа комбинаций чаще всего применяют следующие:

1) получение фракции мембран путем выделения отдельных компонентов клетки, перевод мембранной фракции в растворимое состояние (двухэтапный метод);

2) получение фрагментов мембран путем гомогенизации ткани с одновременным экстрагированием необходимого компонента (одноэтапный метод).

В мембранных исследованиях почти исключительно используется двухэтапный метод, который позволяет получать высокоочищенные фрагменты мембран в малоизмененном виде. Предпосылкой для успешной работы служит наличие суспензии, состоящей из отдельных клеток (асцитическая жидкость, кровь), продолжительно культивировавшихся тканей или относительно мягких по консистенции тканей, таких как селезенка или печень. Часто такие суспензии получить невозможно (мышечная ткань, кишечник, сосуды, солидные опухоли). Из одноэтапных методов особенно широко используется экстракция 3 MKCI, которая позволяет извлекать антигены даже из плотных тканей. Ниже будет описан модифицированный метод, которым в условиях нашей лаборатории были получены антигены комплекса гистосовместимости мыши и человека, антигены, ассоциированные с опухолями, и антигены нормальных тканей.

Copyright © 2011-2012