Главная

Получение антисывороток к антигенам клеточных мембран

Одной из сложнейших задач является получение сывороток с высоким титром антител к мембранным компонентам различных клеток. Перекрестные реакции с аналогичными компонентами других клеток могут существенно искажать результаты. Вероятно, стандартные антисыворотки высокого качества удастся получить, используя технологию клеточных гибридов.

Ввиду разнообразия проблем, связанных с мембранными антигенами, мы ограничимся всего несколькими примерами для иллюстрации применяемых методов. Известно получение гетерологической кроличьей антисыворотки против Т-лимфоцитов мыши путем иммунизации препаратами мембран тимоцитов. После первых этапов адсорбции эти антитела реагировали с 95—100% клеток тимуса и 35—40% клеток селезенки в иммунофлюоресцентной пробе и в тесте на цитотоксичность. Последующей адсорбцией удалось повысить специфичность антисыворотки к мембранному антигену до такой степени, что она реагировала только с Θ-позитивными спленоцитами.

Иммунизацией кроликов препаратами эмбрионального мозга человека была получена антисыворотка, которая после соответствующей адсорбции реагировала с определенными субпопуляциями Т-лимфоцитов. Она оказалась пригодной для дифференциальной диагностики Т-клеточных лейкозов (хронические лимфоцитарные лейкемии). Оказавшееся необычно полезным разделение Т-лимфоцитов мыши по LY-антигену, которое впервые позволило четко разделить Т-лимфоциты на субпопуляции по функциональным признакам, также основано на получении специфических антисывороток. Благодаря им стало возможным выводить инбредные линии мышей с определенными иммунологическими характеристиками. «Голых» мышей принято считать В-клеточными мышами, которые представляют собой идеальных доноров для получения анти-В-лимфоцитарных сывороток.

В частности, введением клеток из лимфатических узлов «голых» мышей кроликам была получена специфическая антисыворотка против В-клеток. Она с успехом применяется для анализа стадий созревания В-лимфоцитов при их превращении в антителообразующие клетки. Антисыворотка, полученная путем введения субпопуляции клеток мышиной плазмоцитомы кроликам, после адсорбции не реагировала с клетками тимуса или с нестимулированными спленоцитами. Она не реагировала со спленоцитами, стимулированными ФГА или Кон-А, но взаимодействовала со спленоцитами, стимулированными липополисахаридом (ЛПС) или со стимулированными В-лимфоцитами. Все вышеприведенные примеры показывают, какое важное значение могут иметь антисыворотки при исследовании процессов клеточной дифференцировки и регуляции.

Copyright © 2011-2012