Главная

Введение радиоактивной метки в белки

Маркирование с помощью 125[I]
Мечение 3[H] и 14[C]

Меченные радиоактивными изотопами белки, гормоны, антитела, нуклеиновые кислоты и гаптены находят широкое применение в изучении реакций АГ — АТ (антитело) и в самых разнообразных иммунобиологических исследованиях. Вид метки и ее активность зависят от цели исследования. Мечение метаболитов 3[Н] (бета-излучатель, энергия частиц 18 кэВ, период полураспада 12,3 года) 14[С]-ацетильными группами (бета-излучатель, энергия частиц 156 кэВ, период полураспада 5730 лет) или 35[S]-метионином (бета-излучатель, 167 кэВ, 87 дней) довольно быстро приводит к образованию in vivo или in vitro соединений с небольшой специфической активностью.

Можно получить меченые соединения, например антигены, иммунологические свойства которых идентичны немеченым антигенам. Высокую специфическую активность получают in vitro восстановительным метилированием (превращение аминогрупп в моно- или диметил-аминогруппы). Этот метод позволяет без затруднений вводить в соединения двойную метку — 3[Н] и 14[С]. Широкое распространение получило мечение белков радиоактивным йодом. Для этой цели используют изотопы [125I] и [131I], которые позволяют получать препараты с высокой специфической активностью. В обращении 125l[I] удобнее ввиду его более длительного периода полураспада (60 дней по сравнению с 8 днями) и меньшей энергии излучения (35 кэВ по сравнению с 700 кэВ), чем 131[I]. Оба изотопа дают γ-излучение, кроме того, 131[I] обладает также β-излучением. Мечение белка основано на его взаимодействии с высвобождающимся при окислении свободным радиоактивным йодом. Включение йода в ароматическое кольцо тирозина происходит при значении рН, близком к нейтральному. Повышение рН приводит к взаимодействию йода с сульфгидрильными группами, а также с гистидином и триптофаном.

Помимо таких окислителей, как персульфаты, йодаты, нитриты, гипохлориты, перекись водорода, широкое применение нашли хлорид йода, хлорамин Т, электрохимический метод, ферментативное йодирование при помощи лактопероксидазы. С использованием последних методов можно вводить метку 211[At] в белки и гормоны. Этот изотоп представляет собой α-излучатель с энергией частиц 5,9 мэВ, малой длиной свободного пробега в воде (60 мкм) и коротким периодом полураспада (7,2 ч), что позволяет использовать 211[At] для специфической инактивации сенсибилизированных лимфоцитов или для селективной иммуносупрессии in vivo. После маркирования белок отделяют от несвязавшегося йода и продуктов окисления при помощи гель-фильтрации, диализа, осаждения, ионообменной хроматографии и других методов. Меченые продукты проверяют в отношении электрофоретических и иммунологических свойств, а также стабильности. Для сохранения исходных свойств белков степень йодирования не должна превышать 1. Данному вопросу посвящены специальные обзоры.

Copyright © 2011-2012