Главная

Реакция торможения распластывания макрофагов. Модификации метода

Если в прямой РТРМ антигенореактивные, высвобождающие лимфокины, Т-лимфоциты и макрофаги (индикаторные клетки) культивируют совместно, то в непрямой РТРМ этапы реакции разделены. Сначала лимфоциты, выделенные из периферической крови больного или экспериментального животного, инкубируют 18—24 ч со специфическим АГ в полной среде для культивирования. Клетки удаляют центрифугированием, надосадочную фракцию стерилизуют фильтрацией и хранят ее при —20 °С.

Поскольку при культивировании возможно высвобождение AT, рекомендуется надосадочную фракцию высолить 40% сульфатом аммония, отбросить возможный осадок и отдиализировать не выпавшие в осадок белки от соли. Это довольно важный момент, поскольку цитофильные антитела, так же как и комплексы АГ — AT, могут оказывать ингибирующее влияние на макрофаги и приводить к ложноположительным результатам. На втором этапе КПЭ морской свинки смешивают в соответствующей концентрации с лимфокинсодержащей надосадочной фракцией и инкубируют 2 ч при 37°С. Преинкубация не требуется. Прочие модификации касаются вида камер, типа культуральных сред и условий культивирования. Так, например, было показано, что инкубация в атмосфере, содержащей 5% СО2, улучшает адгезию и распластывание клеток.

Copyright © 2011-2012