Главная

Метод мембранной иммунофлюоресценция. Оценка метода

МИФ обладает не только обычными преимуществами иммуно-гистологических методов, но также позволяет проводить количественные и качественные исследования клеточных мембран в нативном состоянии. Однозначная локализация флюоресценции возможна благодаря комбинации фазово-контрастной и флюоресцентной микроскопии. Методически более простая прямая МИФ дает удовлетворительные результаты только в случае высокой чувствительности системы (препараты АТ (антитело) с высокими титрами, фотолюминесценция). Непрямая МИФ более чувствительна, хотя и менее специфична, часто наблюдаются неспецифические реакции, которые можно установить с помощью продуманной системы контроля.

К числу преимуществ непрямой МИФ относится и то, что меченные флюорохромом вторые антитела пригодны для самых различных диагностических систем, использующих первые АТ (антитело) одного вида животного. Мечение флюорохромом обоих АТ (антитело) в непрямой системе способно повысить чувствительность до максимума. Повышение чувствительности должно сопровождаться повышением специфичности. Желательно использовать вместо полных АТ (антитело) F(ab) - или Р(аb)2 - фрагменты. Если отсутствуют АС к фрагментам Ig, можно использовать протеин А золотистого стафилококка для блокады Fc-фрагментов. Для определения В-клеток используют смесь АТ (антитело) к легким цепям χ и λ для определения Т-клеток — моноклональные сыворотки к Т-клеточным антигенам. Желательно проводить предварительный контроль новых серий антисывороток с модельными системами, содержащими известные мембранные маркеры (линии клеток). Стандартизация МИФ и создание микровариантов обусловливают растущую в клинике популярность МИФ при подсчете В- и Т-клеток в диагностике первичных и вторичных иммунодефицитных состояний, классификации лимфопролиферативных заболеваний. МИФ является основным методом определения В-клеток, а наряду с Е-розеткообразованием также и Т-клеток (при использовании моноклональных AT). Особое внимание нужно обращать на моноциты, которые следует рассматривать как ложноположительные клетки при выделении лимфоцитов в градиенте фиколл — изопак. Если отсутствует устройство для фазово-контрастной микроскопии, моноциты можно обнаруживать по захвату частиц латекса или по окрашиванию на пероксидазу. Неживые клетки можно обнаружить по прокрашиванию их ядра этидий-бромидом (добавление 0,5 мл раствора этидий-бромида в концентрации 2 мг/л в конце инкубации). Антитела к антигенам клеточных мембран представляют все возрастающий интерес для диагностики аутоиммунных заболеваний печени (AT к мембране гепатоцитов) и некоторых форм сахарного диабета (AT к мембранам островковых клеток поджелудочной железы).

Copyright © 2011-2012