Главная

Слияние клеток

Плазмоцитомные клетки в количестве 2х107 (например, Х63 Ag 8.653), взятые в логарифмической фазе культивирования и дважды отмытые культуральной средой для слияния, добавляют к отмытым клеткам селезенки мыши.

Гибридомная технология: слияние клеток, ГАТ-селекция, выявление гибридом

Гибридомная технология: слияние клеток, ГАТ-селекция, выявление гибридом

Суспензию клеток тщательно перемешивают и центрифугируют при 300 g. После отсасывания надосадочной фракции осадок ресуспендируют в небольшом количестве среды. Затем в течение 2 мин по каплям добавляют 1 мл раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ), следя за равномерным смешиванием жидкостей. Избыток полиэтиленгликоля разводят добавлением бессывороточной среды для слияния. Для этого при постоянном покачивании сосуда с интервалом в 2 мин последовательно прибавляют 1, 2, 4 и 8 мл среды для слияния. Добиваются равномерного распределения клеток во всем объеме жидкости. Клетки собирают центрифугированием при 300 g, надосадочную фракцию отбрасывают. Все процедуры проводят в условиях минимальной обсемененности микробами (в ламинарном боксе) при комнатной температуре.

Copyright © 2011-2012