Главная

Титрование комплемента. Оценка метода

Определение общей активности комплемента при помощи вышеописанного метода позволяет сделать заключение о его литической способности. Это важная величина, но она не отражает всех биологических свойств комплемента. Приведенная схема анализа позволяет получить только полуколичественную оценку, поскольку значение СН50 зависит от используемых компонентов реакции. Скорость лизиса определяется наиболее медленной составляющей каскада реакций. Хотя в гемолизе принимают участие все компоненты от С1 до С9, количественные изменения их соотношений вышеописанная система не отражает. Для стандартизации исследований можно применять референс-препарат ВОЗ для определения СН50. В результате обширных исследований было установлено, что коэффициент вариации одноразовых определений СН50 очень незначителен. Ошибка метода меньше, чем изменения активности комплемента, обусловленные циркадными ритмами. Для обычных лабораторных исследований предпочтительнее проводить гемолиз в геле агарозы. Гемолиз сенсибилизированных ЭБ применяется для определения активации комплемента по классическому пути. Для определения активации комплемента по альтернативному пути используют несенсибилизирванные эритроциты морской свинки или кролика. В этом случае следует обращать внимание на катионный состав проб. Наши опыты с эритроцитами морской свинки в растворе Олсвера 1—3-недельной давности показали, что оптимальной является 1% концентрация. При исследовании альтернативного пути активации комплемента также следует обращать внимание на своевременное охлаждение пластин ввиду возможного преждевременного гемолиза. Ввиду термолабильности комплемента следует тщательно соблюдать условия сбора и хранения исследуемых сывороток. Этот вопрос в общих чертах приходится решать при постановке гемолиза в агарозе. Уже упоминавшаяся консервация калий-боратным раствором позволяет осуществлять довольно длительное хранение при 4°С. Титрование комплемента не дает сведений о состоянии отдельных компонентов системы комплемента, например, при нормальном СН50 содержание С4 может быть крайне низким. Значения СН50 могут быть снижены ввиду снижения уровня С2. Известны генетические нарушения, встречающиеся весьма редко, которые приводят к снижению значений СН50. В настоящее время отдельные компоненты системы комплемента определяют иммунохимически при помощи специфических антисывороток. Антисыворотки к CI, С3, С3b, активатору С3, С4, С5 имеются в продаже. Определение отдельных компонентов проводят по Манчини, нефелометрически, турбидиметрически или при помощи электроиммунодиффузии. Для клинических целей, как правило, достаточно определять СН50 и содержание компонентов С3 и С4.

Copyright © 2011-2012